体外培育牛黄
Tiwɑi Peiyu Niuhuɑng
BOVIS CALCULUS SATIVUS

本品以牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。

【性状】　本品呈球形或类球形，直径0.5～3cm。表面光滑，呈黄红色至棕黄色。体轻，质松脆，断面有同心层纹。气香，味苦而后甘，有清凉感，嚼之易碎，不粘牙。

【鉴别】　（1）取本品粉末少量，用清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色。

（2）取本品粉末少许，用水合氯醛试液装片，不加热，置显微镜下观察：不规则团块由多数黄棕色或棕红色小颗粒集成，稍放置，色素迅速溶解，并显鲜明金黄色，久置后变绿色。

（3）取本品，照〔含量测定〕胆红素项下的方法试验，供试品色谱中应呈现与胆红素对照品色谱峰保留时间相对应的色谱峰。

（4）取本品粉末0.1g，加盐酸1ml和三氯甲烷10ml，充分振摇，混匀，三氯甲烷液呈黄褐色，分取三氯甲烷液，加氢氧化钡试液5ml，振摇，即生成黄褐色沉淀。分离除去水层和沉淀，取三氯甲烷液约1ml，加醋酐1ml与硫酸2滴，摇匀，放置，溶液呈绿色。

（5）取本品，照〔含量测定〕结合胆酸项下的方法试验，供试品色谱中，应呈现与牛磺胆酸对照品和甘氨胆酸对照品色谱峰保留时间相对应的色谱峰。

【检查】水分　不得过9.0%（通则0832第二法）。

游离胆红素　照高效液相色谱法（通则0512）测定（避光操作）。

色谱条件与系统适用性试验　同〔含量测定〕胆红素项下。

对照品溶液的制备　取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含6.87μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备　取本品粉末（过六号筛）约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入二氯甲烷5ml，密塞，称定重量，振摇混匀，冰浴中超声处理（功率500W，频率53kHz）40分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转），分取二氯甲烷溶液，滤过，取续滤液，即得。

测定法　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

供试品色谱中，在与对照品色谱峰保留时间相对应的位置上出现的色谱峰面积应小于对照品色谱峰面积或不出现色谱峰。

游离胆酸　照〔含量测定〕结合胆酸项下色谱条件，供试品溶液的制备方法试验。

对照品溶液的制备　取胆酸对照品、去氧胆酸对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含胆酸0.6mg、去氧胆酸0.15mg的混合溶液，即得。

测定法　分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl与〔含量测定〕结合胆酸项下供试品溶液10μl～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含游离胆酸以胆酸（C₂₄H₄₀O₅）及去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄）的总量计，不得过13.0%。

【含量测定】结合胆酸　照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（ACCHROM Xaqua C18柱，柱长为25cm，柱内径为4.6mm，粒径为5μm；或分离性能相当的色谱柱）；以乙腈为流动相A，以0.2%三氟乙酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；用蒸发光散射检测器检测。取牛磺胆酸对照品、牛磺猪去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品及去氧胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按牛磺胆酸峰计算应不低于10000；牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度应大于2.0，鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度应大于1.5。

对照品溶液的制备　取牛磺胆酸对照品、牛磺去氧胆酸对照品、甘氨胆酸对照品、甘氨去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含牛磺胆酸0.2mg、牛磺去氧胆酸0.08mg、甘氨胆酸0.2mg、甘氨去氧胆酸0.08mg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备　取本品粉末（过三号筛）0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率500W，频率53kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法　分别精密吸取对照品溶液5μl、10μl、20μl，供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标对数方程计算含量，即得。

本品按干燥品计算，含结合胆酸以牛磺胆酸（C₂₆H₄₅NO₇S）、牛磺去氧胆酸（C₂₆H₄₅NO₆S）、甘氨胆酸（C₂₆H₄₃NO₆）及甘氨去氧胆酸（C₂₆H₄₃NO₅）的总量计，不得少于4.0%。

胆红素　照高效液相色谱法（通则0512）测定（避光操作）。

色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1%冰醋酸溶液（95∶5）为流动相；检测波长为450nm。理论板数按胆红素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备　取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含40μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备　取本品粉末（过六号筛）约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入10%草酸溶液10ml，密塞，涡旋混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷100ml，密塞，称定重量，充分振摇，涡旋混匀，超声处理（功率500W，频率53kHz，水温25～35℃）40分钟，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心（转速为每分钟4000转），分取二氯甲烷液，滤过，取续滤液，即得。

测定法　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含胆红素（C₃₃H₃₆N₄O₆）不得少于25.0%。

【性味与归经】　甘，凉。归心、肝经。

【功能与主治】　清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解毒。用于热病神昏，中风痰迷，惊痫抽搐，癫痫发狂，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。

【用法与用量】　0.15～0.35g，多入丸散用。外用适量，研末敷患处。

【注意】　孕妇慎用；偶有轻度消化道不适。

【贮藏】　密闭，遮光，防潮，防压，室温保存。

附：1．去氧胆酸质量标准

去氧胆酸

本品由牛胆汁经提取、加工制成。

〔性状〕　本品为白色的结晶性粉末。气微，味微苦。

本品易溶于冰醋酸和乙醇，不溶于水。

〔鉴别〕　取本品10mg，加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15∶7∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

〔检查〕 干燥失重　取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过0.5%（通则0831）。

炽灼残渣　不得过0.2%（通则0841）。

〔含量测定〕　取本品约0.5g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）60ml，置水浴中加热使溶解，冷却，加酚酞指示液数滴及新沸过的冷水20ml，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，近终点时加新沸过的冷水100ml，继续滴定至终点。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于39.26mg的去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄）。

本品按干燥品计算，含去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄）不得少于95.0%。

〔用途〕　体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕　密封。

2．胆酸质量标准

胆酸

本品由牛、羊胆汁或胆膏经提取、加工制成。

〔性状〕　本品为白色的结晶性粉末。气微，味苦。

〔鉴别〕　取本品10mg，加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15∶7∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

〔检查〕 干燥失重　取本品，在105℃干燥4小时，减失重量不得过0.5%（通则0831）。

炽灼残渣　不得过0.2%（通则0841）。

〔含量测定〕　取本品约0.4g，精密称定，置250ml锥形瓶中，加水20ml和乙醇40ml，用表面皿覆盖，置水浴中缓缓加热使完全溶解，冷却，加酚酞指示液5滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于40.86mg的胆酸（C₂₄H₄₀O₅）。

本品按干燥品计算，含胆酸（C₂₄H₄₀O₅）不得少于95.0%。

〔用途〕　体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕　密封。

3．复合胆红素钙质量标准

复合胆红素钙

本品由牛胆汁、胆红素和饱和氢氧化钙溶液经加工制成。

〔性状〕　本品为棕红色或棕黄色的粉末。味微腥。

〔鉴别〕　取本品粉末5mg，加三氯甲烷15ml，加盐酸溶液（5→10）0.1ml，超声处理30分钟，加三氯甲烷35ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取胆红素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶1∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

〔检查〕 水分　不得过5.0%（通则0832第二法）。

〔含量测定〕 对照品溶液的制备　取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml中含胆红素10μg）。

标准曲线的制备　精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置具塞试管中，加乙醇至9ml，各精密加入重氮化溶液（甲液：取对氨基苯磺酸0.1g，加盐酸1.5ml与水适量使成100ml。乙液：取亚硝酸钠0.5g，用水溶解并稀释至100ml，置冰箱内保存。临用时，取甲液10ml与乙液0.3ml，混匀）1ml，摇匀，在15～20℃的暗处放置1小时，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在533nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法　取本品细粉，约10mg，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7∶3）的混合溶液60ml、盐酸1滴，摇匀，置水浴上加热回流30分钟，放冷，转移至100ml棕色量瓶中，容器用少量上述混合溶液洗涤，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，摇匀。精密量取上清液10ml，置50ml棕色量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取3ml，置具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加乙醇至9ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含胆红素的重量（mg），计算，即得。

本品按干燥品计算，含胆红素（C₃₃H₃₆N₄O₆）不得少于43.0%。

〔用途〕　体外培育牛黄的原料。

〔贮藏〕　密封。