3420　伤寒Vi多糖分子大小测定法

本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（K_D）和多糖在规定K_D值以前的回收率。

试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定　同通则3419第二法。

测定法　取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管3～5ml。照O-乙酰基测定法（通则3117），测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量，求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积，即为多糖主峰峰顶洗脱体积V_e。

按下式计算：

式中　K_D为供试品分配系数；

V_e为供试品洗脱液体积，ml；

V_o为空流体积，ml；

V_i为柱床体积，ml。

计算供试品在K_D值≤0.25的多糖回收率：

式中　R_x为K_D值≤0.25供试品的多糖回收率，%；

A_x为供试品在K_D值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量；

A_t为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量。

【附注】过柱操作在10～20℃进行。