3425 抗A、抗B血凝素测定法

3425 抗A、抗B血凝素测定法
    （间接抗人球蛋白法）
    本法系采用间接抗人球蛋白法（Coombs试验），测定供试品中抗A、抗B血凝素。
    试剂  （1）红细胞悬液  取A型、B型及RhD阳性的O型红细胞各3例，分别混合，用适量生理氯化钠溶液洗涤3次，最后以每分钟2000转离心5分钟，吸取沉淀红细胞适量，用生理氯化钠溶液分别制成5%（ml/ml）红细胞悬液。自红细胞采集之日起1周内使用。
    （2）抗人球蛋白血清  为多价抗人球蛋白血清，使用前需标定，选择适宜的稀释度用于试验，如生产厂商有说明，按说明书稀释后使用，也可按附注方法确定。
     测定法  取供试品适量，用生理氯化钠溶液做2倍系列稀释，每个稀释度的供试品使用2排管（75mm×12mm小试管），每管分别加入供试品溶液0.2ml，向第1排各管加A型5%红细胞悬液0.2ml，第2排各管加B型5%红细胞悬液0.2ml，混匀，置37℃水浴30分钟，用适量的生理氯化钠溶液洗涤3次，每次以每分钟1000转离心1分钟，每管加入抗人球蛋白血清0.2ml，混匀，以每分钟1000转离心1分钟，肉眼观察结果。本试验同时设阴性对照、阳性对照及红细胞对照。
    （1）阴性对照  取AB型人血清0.2ml（双份），分别加入5%A型及B型红细胞悬液0.2ml，混匀，自“置37℃水浴30分钟”起，同法操作。
    （2）阳性对照  取抗RhD血清（IgG型）0.2ml，加入5%RhD阳性O型红细胞0.2ml，混匀，自“置37℃水浴30分 钟”起，同法操作。
    （3）红细胞对照  取生理氯化钠溶液0.2ml（双份），分别加入5%A型及B型红细胞悬液0.2ml，混匀，自“置 37℃水浴30分钟”起，同法操作。
    结果判定  阴性对照及红细胞对照结果均呈阴性，阳性对照结果不低于“+ + +”，试验成立。
    抗A、抗B血凝素滴度以产生“ + ”凝集的供试品最高稀释倍数计算，不计红细胞悬液及抗人球蛋白血清的体积。
    【附注】  （1）供试品为凝血因子Ⅷ制剂时，需先用生理氯化钠溶液预稀释成每1ml中含4IU后，再进行测定。
    （2）抗人球蛋白血清的标定  将抗人球蛋白血清和抗RhD血清分别用生理氯化钠溶液做2倍系列稀释，每管0.2ml，于稀释的抗RhD血清管中加入5%RhD阳性的O型压积红细胞悬液0.1ml，混匀后置37℃水浴中30分钟，用生理氯化钠溶液洗3次并配成2%红细胞悬液，取每个稀释度致敏红细胞悬液0.2ml，分别加入1排稀释的抗人球蛋白血清中，混匀，以每分钟1000转离心1分钟，判定结果。用等量未致敏人RhD阳性O型红细胞替代致敏红细胞，同法操作，作为阴性对照。阴性对照成立，以出现“+”血凝反应的抗RhD血清的最高稀释倍数所对应的抗人球蛋白血清的最高稀释倍数为最适稀释度。
    （3）红细胞凝集判定标准如下：
      ++++  —个结实的凝集块；
      +++  几个大的凝集块；
      ++  中等大的凝集块，背景清晰；
      +  小凝集块，背景浑浊；
      阴性  无凝集和溶血。
    （4）阴性对照、阳性对照、红细胞对照与供试品试验应同步进行。