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3424 肝素含量测定法

来源:四部   分类:通则   页码:260  
3424 肝素含量测定法
(凝固法) 本法系依据硫酸鱼精蛋白能中和抗凝剂肝素,从而影响血浆凝固时间的原理,测定供试品中肝素含量。 试剂 (1)缺血小板人血浆 无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂(体积比9:1)中,混匀,以每分钟1500转4℃离心30分钟,用塑料注射器取上层2/3的血浆,以每分钟3500转4℃离心30分钟,取上层2/3血浆,分装于塑料管中,每支3ml,-40℃保存备用。 (2)三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.5) 称取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.27g,加水溶解并稀释至1000ml(用盐酸调pH值至7.5)。 (3)脑磷脂混悬液 冻干脑磷脂加水复溶,取适量,用生理氯化钠溶液稀释,稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200~300秒。 (4)0.025mol/L氯化钙溶液 称取氯化钙(CaCl2•2H2O)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化钙贮备液。临用时,用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。 (5)硫酸鱼精蛋白溶液 取硫酸鱼精蛋白适量,用pH7.5 Tris缓冲液溶解并稀释成每1ml含1~20mg的溶液。 供试品溶液的制备 于每支含不同浓度的硫酸鱼精蛋白溶液10μl的塑料管中,分别加入按标示量复溶后的供试品0.5ml,混匀。 测定法 在已含有缺血小板人血浆0.1ml的塑料管中,加入脑磷脂混悬液0.1ml,混匀,37℃放置1分钟,加供试品溶液0.1ml、已预热至37℃0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。用Tris缓冲液(pH7.5)0.1ml替代供试品溶液,同法操作,作空白对照。空白对照凝固时间不低于200秒,试验成立。取凝固时间最短的供试品管,作为硫酸鱼精蛋白中和0.5ml供试品中的肝素量。硫酸鱼精蛋白10μg中和1IU肝素。例如凝固时间最短的供试品管中含硫酸鱼精蛋白30μg,则中和供试品0.5ml中的肝素量为3IU,即供试品每1ml含6IU肝素。 【附注】 (1)直接与血和血浆接触的器具应为塑料制品 或硅化的玻璃制品。 (2)采用全自动凝血仪操作时,参考仪器使用说明书进行。

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