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1218 降钙素生物测定法

来源:四部   分类:通则   页码:172  
1218 降钙素生物测定法
本法系通过比较降钙素标准品(S)与供试品(T)对大鼠血钙降低的程度,以测定供试品的效价。 溶剂的制备 称取牛血清白蛋白0.2g,加水20ml,混匀,置56℃水浴中保温1小时,取出放至室温,于-10~-20℃下冻存。实验前取出,于36℃±0.5℃水浴中将其融化。加至含有2g醋酸钠的水溶液中,加入浓盐酸约3.5ml,再加水至总量近200ml,用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至3.5~4.5,最后加水至200ml。溶剂也可按下述步骤制备:称取氯化钠1.88g、结晶醋酸钠0.5g,置于300ml烧杯中,加入醋酸0.5ml、去离子水250ml,搅拌使溶解,最后加入牛血清白蛋白0.25g,放置20分钟以上,轻轻摇动使溶解,即得,可提前1天配制,4℃保存。 标准品溶液的制备 试验当日,按降钙素标准品的标示效价,用上述溶剂,按高、低剂量组(dS2、dS1)配成2种浓度的标准品溶液。一般高浓度标准品溶液控制在50~100mIU/ml。高、低剂量的比值(r)不得大于3:1。 供试品溶液的制备 按供试品中降钙素的标示量或估计效价(AT),照标准品溶液的制备法制成高、低(dT2、dT1)2种浓度的供试品溶液,其比值(r)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组所致反应平均值应相近。 测定法 取健康合格,体重200~250g(皮下注射,一次实验所用大鼠体重相差不超过20g)、70~80g(静脉注射,一次实验所用大鼠体重相差不超过15g),同一性别,同一来源的大鼠。实验前禁食16小时,自由饮用蒸馏水或去离子水,按体重随机等分成4组,分别为标准品高、低剂量组和供试品高、低剂量组,每组不少于5只。将各组动物称重并编号,分别按体重给各组动物于腹部皮下注射(或尾静脉注射)相应浓度的标准品或供试品溶液,给药体积为0.4ml/100g体重。注射后每只准确计时1小时,然后按给药前后顺序分别自眼静脉丛取血。用适宜的方法,如邻甲酚酞络合剂测定血钙值。照生物检定统计法(通则1431)中量反应平行线测定法计算效价及实验误差。 本法的可信限率(FL%)不得大于45%。

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