3529 重组链激酶生物学活性测定法

3529 重组链激酶生物学活性测定法
    本法系依据链激酶和纤溶酶原形成的复合物能激活游离的纤溶酶原为有生物学活性的纤溶酶，纤溶酶能降解人纤维蛋白为可溶性的纤维蛋白片段，在纤维蛋白平板上出现透明的溶解圈，以此定量测定重组链激酶的生物学活性。
    试剂  （1）人凝血酶溶液  用生理氯化钠溶液配制成每1ml含100IU，于-20℃保存。
    （2）人纤溶酶原溶液  用生理氯化钠溶液配成每1ml含0.5mg，于-20℃保存。
    （3）人纤维蛋白原溶液  试验前配制，配制前将人纤维蛋白原和备用的生理氯化钠溶液均置37℃水浴预热15分钟，然后用适量生理氯化钠溶液溶解，置37℃水浴静置保温30分钟，使其完全溶解，配制成每1ml含6mg溶液待用。
    标准品溶液的制备  按使用说明书，将重组链激酶生物学活性测定国家标准品复溶后，用生理氯化钠溶液稀释成每1ml含1000IU、250IU、62.5IU、15.6IU、3.9IU5个稀释度，待用。
    供试品溶液的制备  供试品按标示量加生理氯化钠溶液复溶后，用生理氯化钠溶液稀释至约每1ml含100IU或1μg。
    测定法  称取琼脂糖125mg，加生理氯化钠溶液23ml，煮沸使之溶胀，置55~60℃水浴中平衡，加每1ml含100IU人凝血酶溶液14μl，人纤溶酶原溶液（每1ml含0.5mg）280μl，边加边摇匀，加每1ml含6mg人纤维蛋白原溶液2.2ml，不停地摇匀，浑浊后立即倒入直径8cm的平皿中，水平放置充分凝固后，4℃放置至少30分钟待用（应在2天之内使用）。在含纤维蛋白平皿内打孔，孔径为2mm，在孔内分别加入供试品溶液和标准品溶液，每孔l0μl，每个稀释度做2孔，37°C湿盒水平放置24小时。纵向和横向量取溶圈直径，各2次，取平均值。以标准品溶液各个稀释度的生物学活性的对数对其相应的溶圈直径的对数作直线回归，求得直线回归方程，根据供试品的溶圈直径的对数求得供试品的生物学活性。