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3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法
来源：三部 分类：三部通则 页码：5163502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法 本法系以酶联免疫法测定供试品中的甲型肝炎病毒抗原含量，并以参比疫苗为标准，计算供试品的相对效力。 参比疫苗及供试品溶液制备 将参比疫苗与供试品采用适宜方法进行解离后，用相应供试品稀释液进行倍比稀释，取1：2、1：4、1：8、1：16、1：32或其他适宜5个稀释度进行测定。 测定法 用纯化的甲肝病毒抗体包被酶标板，每孔100μl，2~8℃放置过夜，然后洗板、拍干。用10%牛血清PBS溶液进行封闭，每孔200μl，37℃孵育1小时。 取已包被酶标板，加入各稀释浓度的参比疫苗和供试品，每个稀释度加3孔，每孔100μl，37℃孵育1小时或2~8℃过夜，洗板后加酶结合物，每孔加100μ1，37℃孵育1小时。 洗板后加显色液，每孔100μl，37℃孵育10~15分钟，加终止剂50μl，读取吸光度（A）。 结果计算 将测出的参比疫苗及供试品的A均值乘以1000后记录于下表。 ———————————————————————————————————————————————————— 稀释度 参比疫苗A值×1000（S） 供试品A值×1000（T） ---------------------------------------------------- 1：2 S5 T5 1：4 S4 T4 1：8 S3 T3 1：16 S2 T2 1：32 S1 T1 ———————————————————————————————————————————————————— 供试品抗原含量=参比疫苗抗原含量×antilg（V/W×lg2） V=0.2（T1+ T2+ T3+ T4+ T5）-0.2（S1+S2+S3+S4+S5） W=0.1（T5-T1+S5-S1）+0.05（T4-T2+S4-S2） 供试品抗原含量 体外相对效力= ———————————————————— 参比疫苗抗原含量