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3423 活化的凝血因子活性检查法

来源:三部   分类:三部通则   页码:513  
3423 活化的凝血因子活性检查法
本法系依据活化的凝血因子在脑磷脂存在下,使缺血小板人血浆发生凝固的原理,将供试品和缺血小板人血浆及脑磷脂混合,测定凝固时间,根据凝固时间判定供试品是否含有活化的凝血因子。 试剂 (1)缺血小板人血浆 无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂(体积比9:1)中,混匀,以每分钟1500转4℃离心30分钟,用塑料注射器取上层2/3的血浆,以每分钟3500转4℃离心30分钟,取上层2/3血浆,分装于塑料管中,每支3ml,保存于-40℃备用。 (2)三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.5) 称取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.27g,加水溶解并稀释至1000ml(用盐酸调pH值至7.5)。 (3)脑磷脂混悬液 冻干脑磷脂加水复溶,量取适量用生理氯化钠溶液稀释,稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200~300秒。 (4)0.025mol/L氯化钙溶液 称取氯化钙(CaCl2•2H20)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化钙贮备液。临用时,用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。 (5)硫酸鱼精蛋白溶液 称取硫酸鱼精蛋白适量,用PH7.5的Tris缓冲液溶解并稀释成适宜浓度的溶液。 供试品溶液的制备 取复溶后的供试品,根据测得的肝素含量(通则3424)加硫酸鱼精蛋白溶液适量,中和供试品中的肝素(10μg硫酸鱼精蛋白中和1IU肝素),再用Tris缓冲液(pH7.5)稀释10倍和100倍。 测定法 取缺血小板人血浆0.1ml,加脑磷脂混悬液0.1ml,混匀,37℃放置1分钟,加供试品溶液(10倍或100倍稀释液)0.1ml、已预热至37℃的0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。用Tris缓冲液(PH7.5)0.1ml替代供试品溶液,同法操作,作空白对照。 结果判定 空白对照凝固时间不低于200秒,试验成立。1:10和1:100供试品稀释液凝固时间均应不低于150秒。 【附注】(1)直接与血和血浆接触的器具应为塑料制品或硅化的玻璃制品。从供试品稀释到测定完毕应在30分钟内完成。 (2)供试品每个稀释度做2管。

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