3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法

3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法
    本法系依据可溶性糖经无机酸处理脱水产生糖醛（戊糖）或糖醛衍生物，生成物能与酚类化合物缩合生成有色物质，以此测定多糖的含量。
    试剂  （1）0.1%三氯化铁盐酸溶液  准确称取三氯化铁FeCl3•6H2O）0.1g，放入清洁的试剂瓶内，加盐酸100ml，待溶解后置2~8°C冰箱保存。
    （2）地衣酚（3，5-二羟基甲苯）乙醇溶液  称取地衣酚1g，放入10ml量瓶中，加95%乙醇至10ml。临用前配制。
    （3）25μg/ml核糖对照品溶液
    测定法  量取1ml水，加入5ml 0.1%三氯化铁盐溶液，混匀后再加入0.4ml地衣酚乙醇溶液，混匀。水浴5分钟后置冰浴，在波长670nm处测定吸光度，作为空白对照。
    先将供试品用水稀释至核糖含量不高于25μg/ml，作为供试品溶液，量取1.0ml自“加5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起，同法操作。
    分别取核糖对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于10ml试管中，每管依次加水0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml，自“加入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起，同法操作。
    结果计算  以核糖对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出供试品溶液的核糖含量。
                                   a×n
        供试品多糖含量（μg/ml）= —————————
                                   0.41
    式中  a为供试品溶液的核糖含量，μg/ml；
          n为供试品稀释倍数。