3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法

3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法
    本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（KD）和多糖在规定KD值以前的回收率。
    试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定  同通则3419第二法。
    测定法  取供试品约1ml（含多糖抗原3~5mg），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15~20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管3~5ml。照O-乙酰基测定法（通则3117），测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量，求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积，即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。
    按下式计算：
                Ve —V0
            KD=————————
                 V1—V0
    式中  KD为供试品分配系数；
          Ve为供试品洗脱液体积，ml；
          V0为空流体积，ml；
          V1为柱床体积，ml；
    计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率：
                     Ax
           Rx（%）=——————×100
                     At
    式中  Rx为KD值≤0.25供试品的多糖回收率，％；
          Ax为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量；
          At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰的含量。
    【附注】过柱操作在10~20℃进行。