3416 鼠IgG残留量测定法

3416 鼠IgG残留量测定法
    本法系用酶联免疫法测定经单克隆抗体亲和色谱方法纯化的重组制品中鼠IgG残留量。
    试剂  （1）包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液） 称取碳酸钠0.32g、碳酸氢钠0.586g，加水溶并稀释至200ml。
    （2）PBS（PH7.4） 称取氯化钠8.0g、氯化钾0.20g、磷酸氢二钠1.44g、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解并稀释至1000ml，121℃灭菌15分钟。
    （3）洗涤液（PBS-Tween20） 量取聚山梨酯20 0.5ml，加PBS稀释至1000ml。
    （4）稀释液  称取牛血清白蛋白0.5g，加洗涤液溶解并稀释至100ml。
    （5）底物缓冲液  （枸橼酸-PBS）磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）1.84g、枸橼酸0.51g，加水溶解并稀释至100ml。
    （6）底物液  取邻苯二胺8mg、30%过氧化氢溶液30μl，溶于底物缓冲液20ml中，临用前配制。
    标准品溶液的制备  按使用说明书用适量水复溶鼠IgG标准品。精密量取适量，用稀释液稀释1ml中含100ng、50ng、25ng、12.5ng、6.25ng的溶液。
    供试品溶液的制备  取供试品适量，用稀释液稀释成每1ml中含1个成品剂量（如未能确定制剂的规格，按成品的最大剂量计算）的溶液。
    测定法  取山羊抗鼠IgG抗体适量，用包被液稀释成每1ml中含10μg的溶液；以100μl/孔加至96孔酶标板内，4℃放置过夜16~18小时），用洗涤液洗板3次；用洗涤液制备1%牛血清白蛋白溶液，以200μ1/孔加至酶标板内，37℃封闭2小时，将封闭好的酶标板用洗涤液洗3次，以100μl/孔加标准品溶液和供试品溶液，37℃放置1小时，将封闭好的酶标板用洗涤液洗3次；按使用说明书用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG抗体，以100μ1/孔加至酶标板内，37℃放置30分钟，用洗涤液洗板3次；以50μ1/孔加入底物液，37℃避光放置20分钟，以50μ1/孔加入终止液（1mol/L硫酸溶液）终止反应。用酶标仪在波长492nm处测定吸光度，应用计算机分析软件进行读数和数据分析，也可使用手工作图法计算。 
    以标准品溶液吸光度对其相应的浓度作标准曲线，线性回归的相系数应大于0.995。以供试品溶液吸光度在标准曲线上读出相应的鼠IgG残留量。
                                        c×n×F
     供试品的鼠IgG残留量（ng/剂量）=   ——————           
                                          T
    
    式中  c为供试品溶液鼠IgG残留量，ng/ml；
          n为供试品溶液的稀释倍数；
          F为成品的剂量规格，IU/剂量或μg/剂量；
          T为供试品的效价或主成分蛋白质含量，IU/ml或μg/ml。