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3121 人血白蛋白多聚体测定法

来源:三部   分类:三部通则   页码:457  
3121 人血白蛋白多聚体测定法
本法系用分子排阻色谱法测定人血白蛋白多聚体含量。 照分子排阻色谱法(通则0514)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱(SEC,排阻极限300kD,粒度10μm),柱直径7.5mm,长60cm;以含1%异丙醇的pH7.0、0.2mol/L磷酸盐缓冲液[量取0.5mol/L磷酸二氢钠200ml、0.5mol/L磷酸氢二钠420ml、异丙醇15.5ml 及水914.5ml,混匀]为流动相;检测波长为280nm;流速为每分钟0.6ml。取每1ml含蛋白质12mg的人血白蛋白溶液20μl,注入色谱柱,记录色谱图,人血白蛋白单体峰与二聚体峰间的分离度应大于1.5,拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为0.95~1.40。 测定法 取供试品适量,用流动相稀释成每1ml约含蛋白质12mg的溶液,取20μl,注入色谱柱,记录色谱图60分钟。 按面积归一法计算,色谱图中未保留(全排阻)峰的含量(%) 除以2,即为人血白蛋白多聚体含量。

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