PDF 

3108 枸橼酸离子测定法

来源:三部   分类:三部通则   页码:451  
3108 枸橼酸离子测定法
第一法 比色法 枸橼酸钠对照品溶液的制备 取经减压干燥至恒重的枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)0.6g,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置50ml量瓶中,用5%三氯乙酸稀释至刻度,摇匀,即得。 供试品溶液的制备 精密量取供试品0.5ml与水4.5ml,加10%三氯乙酸溶液5ml,混匀,置60℃水浴加热5分钟,以每分钟4000转离心20分钟,取上清液备用。 测定法 精密量取供试品溶液1ml,置25ml具塞试管中,精密加吡啶1.3ml,混匀,再精密加醋酸酐5.7ml,立即混匀并置31℃±1℃的水浴中,准确放置35分钟后,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在波长425nm处测定吸光度。另精密量取枸橼酸钠对照品溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.0ml,分别置于具塞试管中,各精密加5%三氯乙酸溶液0.75ml、0.50ml、0.25ml、0.00ml(其相对应的枸橼酸离子含量为0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L、2.0mmol/L),自“精密加吡啶1.3ml”起,同法操作。 以对照品溶液枸橡酸离子浓度对其相应的吸光度作直线回归,求得直线回归方程,计算出供试品溶液中的枸橼酸离子含量(mmol/L),再乘以供试品稀释倍数(20),即为供试品枸橼酸离子含量(mmol/L)。 第二法 高效液相色谱法 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件 用苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基质的阳离子交换色谱柱(H+),粒度9μm或8μm,内径7.8mm,柱长300mm;柱温为50℃;流动相为0.004mol/L硫酸溶液,流速为每分钟0.8ml,示差折光检测器。 测定法 精密称取经减压干燥至恒重的枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)0.735g,置100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,精密量取5.0ml、10.0ml、15.0ml,分别置25ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得相对应的5.0mmol/L、10.0mmol/L、15.0mmol/L枸橡酸离子对照品溶液。分别精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图;另精密量取供试品溶液1ml,置15ml离心管中,精密加1.5%磺基水杨酸溶液1ml,混匀,室温下以每分钟2000转离心10分钟。取上清液,同法测定。 以对照品溶液的枸橼酸离子浓度对其相应的峰面积作直线回归,求得直线回归方程,计算出供试品溶液枸橼酸钠含量(mmol/L),再乘以供试品稀释倍数(2),计算出供试品枸橼酸离子含量(mmol/L)。 【附注】(1)根据供试品枸橼酸离子含量,可适当调整枸橼酸离子对照品溶液浓度。 (2)直线回归相关系数应不低于0.999。 (3)不同厂家的阳离子交换色谱柱(H+)的流速、流动相、柱温等会有所不同,可根据色谱柱说明书对色谱条件进行适当调整。 第三法 高效液相色谱法 照高效液相色谱法(通则0512)测定。 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱,柱长250mm,柱直径4.6mm,粒度5μm。流动相为18.2mmol/L磷酸盐缓冲液,0.1%异丙醇溶液(pH2.0~2.5);柱温:40℃;流速:每分钟1.0ml;样品池温度:室温;运行时间:50分钟;紫外检测器检测波长:210nm。取5.0mmol/L枸橼酸离子溶液20μl,注入色谱柱,记录色谱图,拖尾因子按枸橼酸离子色谱峰测定应为0.95~1.40。 测定法 精密称取经减压干燥至恒重的枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)0.735g,置100ml量瓶中,用超纯水溶解并稀释至刻度。精密量取5.0ml、10.0ml、15.0ml,分别置25ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得相应的5.0mmol/L、10.0mmol/L、15.0mmol/L枸橼酸离子对照品溶液。分别精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图;另精密量取供试品溶液1ml,置15ml离心管中,精密加1.5%磺基水杨酸4ml,混匀。室温静置2小时以上,以每分钟3000转离心10分钟,取上清液,同法测定。 以对照品溶液枸橼酸离子浓度对其相应的峰面积作直线回归,求得直线回归方程。计算供试品溶液枸橼酸离子含量(mmol/L),再乘以相应的供试品稀释倍数(5),即为供试品枸橼酸离子含量(mmol/L)。 【附注】(1)根据供试品枸橼酸离子含量,可适当调整枸橼酸离子对照品溶液浓度。 (2)根据供试品蛋白质浓度,可适当调整沉淀剂磺基水杨酸的加入量。 (3)直线回归相关系数应不低于0.999。

(c)蒲标网 - 中国药典、药品标准、法规在线查询 ( 津ICP备15007510号 )